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—————热启动、速度快、高特异性、可冻干、符合研发生产一体化
| 货号 | 名称 | 规格 | 价格(元) | 说明书 |
| A3831-00 | 热启动Bst4.2 DNA聚合酶(16U/μl)(无甘油) | 1600U | 750 |  |
| 16KU | 5,000 | |||
| A3831-20 | 5xBst4.2 LAMP基础预混液(无甘油) | 100Tx20μl | 1,000 | |
| 500Tx20μl | 4,000 | |||
| A3831-21 | 5xBst4.2 LAMP荧光预混液(无甘油) | 100Tx20μl | 1,000 | |
| 500Tx20μl | 4,000 | |||
| A3831-22 | 5xBst4.2 LHNB变色预混液(无甘油) | 100Tx20μl | 1,000 | |
| 500Tx20μl | 4,000 | |||
| A3831-56 | Bst4.2 LHNB变色冻干球 | 96Tx25μl | 1,250 | |
| 480Tx25μl | 5,000 | |||
| 冻干球的订制服务：单球反应体积20-100μl | ||||
 |
HaiGene Bst4.2系列LAMP相关试剂是HaiGene精心研制的高性能的LAMP扩增用试剂，通用于DNA或RNA的靶标检测。在快速、高耐受性的基础上，不仅实现稳定、快速、高灵敏度的扩增性能，在HotStart性能的加持下，还实现了假阳性的大幅下降。
制品性能特点：
（1） Bst4.0全系包含热启动Aptamer，该配体确保酶在<30℃时，酶活封闭效率>90%,在>60℃时1min内完全释放酶活。该特性利于室温建立反应体系，并大幅降低了低温条件下的非特异扩增。
（2） Bst4.2系列反应温度提升到70℃，大幅降低引物Dimer的形成，提高扩增特异性，并使得粗样品核酸释放更加充分。
（3） Bst4.2系列包含Helicaser，因此，允许在不使用F3/B3引物的情况下进行eLAMP扩增（easy LAMP），并允许FIP/BIP的引物用量降低一倍。这将进一步降低非特异扩增，并使得扩增均一性大幅提升。
（4） 预冻干液体形式的试剂，赋予多用途性，不仅能满足常规的科研需求，还使得冻干产品开发和生产在一种试剂下同步完成。
| Bst2.0 (A3801) |
Bst3.0 (A3901) |
Bst4.0 (A3805) |
热启动Bst4.2 (A3831-00) |
热启动Bst dU5.0 (A3861-00) |
|
| 热启动功能 | 否 | 否 | 否 | 是 | 是 |
| 酶储存液 | 50%甘油 | 50%甘油 | 50%甘油 | 无甘油 | 无甘油 |
| 反应温度 | 65℃ | 65℃ | 65℃ | 70℃ | 65~70℃ |
| 检测底物 | DNA | DNA | DNA/RNA | DNA/RNA | DNA/RNA |
| dUTP使用能力 | 50% | 50% | 50% | 50% | 100% |
| 扩增速度 | ★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★★ | ★★★★ |
| LAMP Mix供货 | 不提供 | 不提供 | 不提供 | A3831-20基础预混液(dNTP) A3831-21荧光预混液(dNTP) A3831-22变色预混液(dNTP) |
A3861-20基础预混液(全dUTP) A3861-21荧光预混液(全dUTP) |
| LAMP冻干品供货 | 不提供 | 不提供 | 不提供 | A3831-56变色冻干球(dNTP) | A3861-22基础冻干瓶(全dUTP) A3861-23荧光冻干瓶(全dUTP) A3861-24基础冻干球(含UDG酶) A3861-25荧光冻干球(含UDG酶) |
1、Bst 4.2 HotStart功能展示
采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2，结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性，而60℃条件下1min内酶活完全释放，恢复100%活性。
2、以Bst 4.2 SYBR Green试剂进行标准LAMP和eLAMP扩增比较
以human Total RNA为模板，采用RnaseP LAMP Primer进行标准LAMP和eLAMP 扩增。在25ul扩增体系中加入10ng、1ng和0ng的RNA，70℃反应40min。从扩增结果可获得，在Helicaser的加持下F3/B3可完全去除，对扩增速度几乎无影响，并且非特异性扩增得到改善。 6 Primer LAMP引物浓度：FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM; F3/B3=0.1 μM。 4 Primer eLAMP引物浓度：FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM。
3、以Bst 4.2 Basic试剂进行DP-eLAMP探针法扩增
在众多的探针法LAMP测试中，DP-LAMP探针法(Displaceable Probe LAMP)为HaiGene推荐的使用方法（参考PMID: 33626039）。在LAMP扩增中将LF或LB引物退火至互补的猝灭oligo，利用链置换活性获得游离的荧光信号（可参考HaiGene A3831-57说明书资料）。该方案可进一步降低LAMP的非特异扩增。下图为DP-eLAMP进行三种荧光标记探针的实验数据。结果显示HotStart Bst4.2总能获得高特异性和高重复性的扩增。
4、以Bst4.2 L-HNB 试剂进行L-HNB (紫罗兰-淡绿) 变色反应（肉眼观察）
以2019-nCoV体外转录RNA为模板，采用eLAMP扩增法（FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM）, 对10000、1000、100、25copies/管的阳性RNA进行检测，ddH20为阴性对照（4重复）。下图为70℃反应30min 后的检测结果。结果表明L-HNB法获得清晰易于区分的颜色变化，极易区分阳性和阴性扩增。
5、以Bst4.2 L-HNB (紫罗兰-淡绿) 变色反应对反应缓冲盐Tris的耐受性测试
以2019-nCoV体外转录RNA为模板，采用eLAMP扩增法（FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM）, 对1000copies/管的阳性RNA进行检测（2重复），ddH20为阴性对照（2重复）。下图为70℃反应30min 后的检测结果。结果表明L-HNB法，在1x浓度下可耐受10mM Tris-HCl的缓冲盐，阳性样本仍然可以充分的变色。该变色方法不受样本中缓冲盐影响。
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2. Rapid Visual Detection of High Nitrogen-Use Efficiency Gene OsGRF4 in Rice (Oryza sativa L.) Using Loop-Mediated Isothermal Amplification Method. Genes (Basel). 2023 Sep 23;14(10):1850.
3. Rapid and visual identification of HIV-1 using reverse transcription loop-mediated isothermal amplification integrated with a gold nanoparticle-based lateral flow assay platform. Front Microbiol. 2023 Jul 12;14:1230533.
4. Rapid Detection of Streptococcus mutans Using an Integrated Microfluidic System with Loop-Mediated Isothermal Amplification. J Microbiol Biotechnol. 2023 May 19;33(8):1101–1110.
5. Rapid point-of-care detection of BK virus in urine by an HFman probe-based loop-mediated isothermal amplification assay and a finger-driven microfluidic chip.PeerJ. 2023 Mar 8;11:e14943.
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9. Real-Time Detection of LAMP Products of African Swine Fever Virus Using Fluorescence and Surface Plasmon Resonance Method. Biosensors (Basel). 2022 Apr 3;12(4):213.
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11.Deep‐dLAMP: Deep Learning‐Enabled Polydisperse Emulsion‐Based Digital Loop‐Mediated Isothermal Amplification. Adv Sci (Weinh). 2022 Jan 24;9(9):2105450.
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