核酸外切酶III(Exo III)——新海基因—

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C5026	核酸外切酶III(Exo III)	5,000U	500
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核酸外切酶 III（ExoIII）来源于E.coli，具有3'-5'外切酶活性，它作用于双链 DNA，从 3' OH 末端方向逐步切去单核苷酸；每次酶与底物结合催化，只有几个核苷酸被除掉，从而在 DNA 分子群内产生渐进缺失。ExoIII的最佳底物为平末端、5'突出末端双链DNA分子，但也可作用于双链DNA的缺刻处，从3'降解DNA分子，释放5'单核苷酸。对于3'突出末端，尤其是多于4nt的几乎完全不切割, 亦不能切割硫代磷酰脂键。核酸外切酶 III 的活性部分依赖螺旋结构，并根据序列的不同而有差异（C＞A=T＞G）。另外，核酸外切酶 III还具有脱嘌呤/嘧啶-核酸内切酶活性、RnaseH活性和3' 磷酸酶活性。组分

应用

非定向巢式缺失
定点突变
链特异性探针的制备
制备用于双脱氧测序的单链底模板

活性定义

50 μl 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟催化E.coli DNA 产生 1 nmol 酸可溶性产物所需要的量定义为一个活性单位。

1X Exonuclease III Buffer

10 mM Bis-Tris（pH 7.0），10 mM MgCl₂，1 mM DTT。

储存

-20℃可保存3年，避免反复冻融。

热失活

70°C，20min。

功能性测试

（该实验结果来自HaiGene实验室，未经允许，不得转载）

1. 分别用不同的内切酶切质粒DNA产生5'突出末端、平末端和3'突出末端产物，然后用Exonuclease III（2.5U）分别酶切这三种产物（5 μg），将酶切产物琼脂糖电泳。泳道1：5'突出末端产物；泳道2：平末端产物；泳道3：3'突出末端产物；M：DNA Marker 10000。

2. EcoR V酶切pUC57质粒获得酶切产物，然后分别用不同量的Exonuclease III酶切该产物获得渐进缺失产物。泳道1：对照（不加Exonuclease III); 泳道2：0.312U Exonuclease III; 泳道3：0.625U Exonuclease III; 泳道4：1.25U Exonuclease III; 泳道5：2.5UExonuclease III; M：DNA Marker 10000。